用水浴鍋?zhàn)鲑|(zhì)粒DNA提取的實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)方法原理： 

質(zhì)粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子，是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作，進(jìn)行遺傳工程改良物種等工作時zui主要的DNA載體。

提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步：

①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴(kuò)增

②細(xì)菌菌體的裂解

③質(zhì)粒DNA的純化

實(shí)驗(yàn)材料：        

大腸桿菌

試劑、試劑盒：ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚LB培養(yǎng)基

儀器、耗材：超凈工作臺、 培養(yǎng)箱、 搖床、 恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、取液器、低溫冰箱、冷凍真空干燥機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外觀測儀

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、材料與試劑準(zhǔn)備

       1.  材料：大腸桿菌。

       2.  儀器：超凈工作臺，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機(jī)，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機(jī)，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀。

       3.  試劑：

      （1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl(pH7.4)，10 mM EDTA(pH8.0)，50 mM葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。

      （2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。

      （3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高壓滅菌，4℃保存。

      （4）3 M NaAc pH5.2，高壓滅菌，4℃保存。

      （5）異丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），無水乙醇，70%乙醇，LB培養(yǎng)基，電泳試劑。